hTERT-RPE1细胞与Puromycin抗性筛选

在用pCDH载体构建细胞器的RPE1细胞系的时候就明显感受到常规的Puromycin浓度（1mg/mL，1000×）似乎并不能有效杀死细胞，虽然最后得到的阳性率还不错（应该是病毒侵染效率足够高），但还是找到了一些资料可以对该过程做以反思。

实验室常用的RPE1细胞株（人视网膜上皮细胞）的全称是hTERT-RPE1，而根据这篇文章中的描述，RPE1细胞在永生化过程中，引入端粒酶（hTERT）时使用了puromycin抗性，因而其本身就是puromycin-resistance的，这解释了为什么正常浓度的puromycin不能有效筛选出阳性克隆。此外，在这篇文章中，还给出了使用Puromycin对hTERT-RPE1阳性筛选的经验浓度是6-8 μg/mL。

hTERT RPE1 cells are resistant to puromycin at a concentration within the range of 0.2–5 µg/ml because hTERT was originally introduced to the ancestral RPE cells with a plasmid pGRN145 (Weinrich et al., 1997) (ATCC, MBA-141) carrying both the Hygromycin B phosphotransferase and PAC genes (Bodnar et al., 1998). However, after conducting preliminary kill-curve experiments, we found that hTERT RPE1 cells can be screened using 6–8 µg/ml of puromycin.