哺乳动物细胞诱导表达系统(Tet-On/Off)

很早就听闻Tet-On诱导表达系统了，但一直没有很好的机会去用，最近正好想要用Tet-On系统来做一个诱导表达细胞系，就来查查这个系统，主要参考这篇文章。

• Das, A. T., Tenenbaum, L. & Berkhout, B. Tet-On Systems For Doxycycline-inducible Gene Expression. Curr Gene Ther 16, 156–167 (2016).

基本诱导表达系统元件

该系统的核心组分为：

• TetR：一个转录抑制因子，可以结合DNA和四环素

• TetO：Tet操纵子，19个核苷酸长的DNA序列，可以结合TetR蛋白调控基因表达

• 四环素：该体系同的化学信号小分子，其常用的形式是四环素的衍生物多西环素（Doxycycline）

目前，经过长期的发展，Tet诱导体系已经发生了足够多的改造，正正反反的全部情况都已经凑齐。具体如下：

• 转录抑制因子，结合Dox后从DNA上释放（Tet-On）

  Thermo的pcDNA6/TR质粒所构建的Tet-On（T-REx系列细胞系）就是该系统

• 转录抑制因子，结合Dox后可以结合DNA（Tet-Off）

• 转录激活因子，结合Dox后从DNA上释放（Tet-Off）

  此时所使用的转录激活因子是tetR与herpes simplex virus VP16 protein（真核生物中一个强转录激活结构域）融合表达的蛋白

• 转录激活因子，结合Dox后可以结合DNA（Tet-On）

  此时所使用的转录激活因子是tetR的点突变体，其可以逆转转录的抑制效果的蛋白

  当下市面上所说的最小的、一个质粒即可完成的Tet-On系统Tet-On 3G即是基于此原理